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大鼠骨特異性堿性磷酸酶(ALP)ELISA試劑盒?實驗使用說明書
發布時間:2025/4/8瀏覽:63次
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  以下是?大鼠骨特異性堿性磷酸酶(ALP)ELISA試劑盒?的實驗使用說明書,綜合操作流程、注意事項及技術要點:

  BS-3487  大鼠骨特異性堿性磷酸酶(ALP)ELISA試劑盒

  一、實驗原理?

  采用?雙抗體夾心法?:

  包被微孔板的大鼠ALP捕獲抗體與樣本中的ALP結合?。

  加入HRP標記的檢測抗體,形成“抗體-抗原-酶標抗體"復合物?。

  TMB顯色,顏色深淺與ALP濃度正相關,450nm測OD值?。

  二、樣本處理?

  血清/血漿?:

  采集后3000rpm離心10-20分鐘,避免溶血?。

  抗凝劑可選EDTA、肝素或檸檬酸鹽?。

  組織勻漿?:

  加入PBS勻漿,3000rpm離心10分鐘取上清?。

  細胞上清液?:

  離心去除顆粒,避免反復凍融?。

  保存?:

  短期存于2-8℃,長期需-20℃保存,避免多次凍融?。

  三、操作步驟?

  標準品稀釋?:

  按說明書梯度稀釋(如40IU/L→2.5IU/L)?。

  加樣?:

  空白孔不加樣,標準孔加50μl標準品,樣本孔先加40μl稀釋液+10μl樣本(5倍稀釋)?。

  溫育?:

  37℃孵育30分鐘,封板膜密封?。

  洗滌?:

  用稀釋后的洗滌液洗板5次,拍干?。

  加酶標抗體?:

  每孔50μl(空白孔除外),37℃復育30分鐘?。

  顯色與終止?:

  依次加入顯色劑A/B各50μl,避光顯色15分鐘,終止液50μl終止反應?。

  檢測?:

  450nm測OD值,15分鐘內完成?。

  四、注意事項?

  試劑準備?:

  使用前平衡至室溫(15-30分鐘),濃縮洗滌液需37℃助溶?。

  加樣精度?:

  使用校準加樣器,避免孔壁接觸,5分鐘內完成加樣?。

  質量控制?:

  每次實驗需做標準曲線及復孔,樣本OD值超標準曲線時需稀釋?。

  干擾因素?:

  避免使用NaN3(抑制HRP活性)或高脂樣本?。

  五、結果計算?

  以標準品濃度為橫坐標、OD值為縱坐標繪制曲線,擬合方程計算樣本ALP濃度?。

  以上操作需嚴格遵循試劑盒說明書,不同批次可能存在差異?。

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